▏ 服務(wù)原理及背景

實(shí)時(shí)熒光定量PCR在檢測(cè)體系中加入熒光基團(tuán)，通過(guò)PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量及定性分析。隨著PCR反應(yīng)的不斷進(jìn)行，帶熒光的PCR產(chǎn)物逐步累積，信號(hào)強(qiáng)度等比例增強(qiáng)。這樣，我們可以通過(guò)熒光信號(hào)的變化來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR產(chǎn)物量的變化，得到一條擴(kuò)增曲線。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增曲線有基線期、指數(shù)期和平臺(tái)期各階段。
基線期，熒光信號(hào)基本為背景信號(hào)，無(wú)法辨別產(chǎn)物的熒光信號(hào)值；
指數(shù)期，熒光信號(hào)超過(guò)背景信號(hào)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)階段的閾值，此時(shí)循環(huán)數(shù)稱為 Ct ( Cycle threshold) 值，PCR模板起始濃度的對(duì)數(shù)值與Ct呈線性關(guān)系。
平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，最終的 PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出起始模板拷貝數(shù)。

▏ 檢測(cè)方法

定量方法包括絕對(duì)定量分析和相對(duì)定量分析，采用SYBR Green I法和Taqman探針?lè)ā?/span>
絕對(duì)定量分析：絕對(duì)定量法也稱作標(biāo)準(zhǔn)曲線法，是一種利用已知的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)定量未知樣本目的模板起始量的方法。以 5-6 個(gè)點(diǎn)梯度稀釋所得的標(biāo)準(zhǔn)品（科佰可以提供大量驗(yàn)證過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品）為模板，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 擴(kuò)增，以目的模板初始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，檢測(cè)到的 CT 值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程，將未知樣本的 CT值帶入該方程即可計(jì)算出目的模板的起始量。
相對(duì)定量分析：相對(duì)定量可分析某一靶基因在不同樣品之間、同一樣品的不同部位之間以及某一樣品的某一部位在不同動(dòng)態(tài)時(shí)期之間的 mRNA 水平上表達(dá)量的比值，也可分析靶基因與內(nèi)參基因在同一樣品中拷貝數(shù)的比值。

▏ 應(yīng)用領(lǐng)域

實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、快速高效的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、臨床診斷、農(nóng)業(yè)、環(huán)境科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，常用于檢測(cè)基因表達(dá)、基因變異、轉(zhuǎn)基因等。

▏ 服務(wù)流程

科佰生物已通過(guò)ISO9001和ISO13485雙體系認(rèn)證，同時(shí)將按照CNAS體系要求來(lái)執(zhí)行QPCR檢測(cè)的各流程，質(zhì)量有保證。

▏ 案例展示

案例一 新冠病毒（SARS-CoV-2）檢測(cè)
應(yīng)用描述：qPCR被廣泛應(yīng)用于新冠病毒的核酸檢測(cè)，作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。
技術(shù)細(xì)節(jié)：針對(duì)病毒RNA的特定區(qū)域（如ORF1ab、N基因等）設(shè)計(jì)引物和探針，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄qPCR（RT-qPCR）檢測(cè)病毒RNA。
優(yōu)勢(shì)：高靈敏度、高特異性，可快速獲得檢測(cè)結(jié)果，支持大規(guī)模篩查。

案例二 乳腺癌基因表達(dá)分析
應(yīng)用描述：qPCR用于檢測(cè)食品或農(nóng)產(chǎn)品中是否存在轉(zhuǎn)基因成分（如轉(zhuǎn)基因大豆、玉米）
技術(shù)細(xì)節(jié)：提取腫瘤組織RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，使用qPCR檢測(cè)特定基因的表達(dá)量。
優(yōu)勢(shì)：高精度定量，可用于個(gè)性化醫(yī)療和治療方案的優(yōu)化。

案例三 轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)
應(yīng)用描述：通過(guò)qPCR檢測(cè)乳腺癌相關(guān)基因（如BRCA1、HER2）的表達(dá)水平，評(píng)估患者的治療反應(yīng)和預(yù)后。
技術(shù)細(xì)節(jié)：針對(duì)轉(zhuǎn)基因作物特定的外源基因序列（如35S啟動(dòng)子、NOS終止子）設(shè)計(jì)引物和探針，進(jìn)行定量檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì)：快速、準(zhǔn)確，滿足食品安全監(jiān)管需求。

案例四 腸道菌群定量分析
應(yīng)用描述：qPCR用于定量分析腸道微生物組中特定菌群的豐度（如乳酸菌、雙歧桿菌）
技術(shù)細(xì)節(jié)：設(shè)計(jì)菌群特異性的16S rRNA基因引物和探針，進(jìn)行定量檢測(cè)。
優(yōu)勢(shì)：高靈敏度，可精確分析微生物群落結(jié)構(gòu)變化。