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hCov-HKU1-E Pseudovirus Standard Reference

CBV30016

產(chǎn)品描述
產(chǎn)品數(shù)據(jù)庫(kù)

 

I. 背景

hCov-HKU12005年在香港發(fā)現(xiàn),是上呼吸道和下呼吸道自限性感染的常見(jiàn)原因,最常見(jiàn)于幼兒。沒(méi)有實(shí)驗(yàn)室診斷,通常通過(guò)呼吸道樣品的逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),HCoV-HKU1呼吸道感染無(wú)法與其他呼吸道病毒引起的感染區(qū)分開(kāi)。治療應(yīng)具有癥狀且符合支持病毒性呼吸道感染的一般指南。

根據(jù)CDCWHO的介紹,針對(duì) hCov-HKU1的核酸診斷一般是針對(duì)RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene NGene E, Gene S更多用于對(duì)應(yīng)藥物和疫苗的開(kāi)發(fā)。NCBI收錄序列為KF686346,全長(zhǎng)29982,基因編碼5個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白:S,M,NHEE。

以往針對(duì)試劑盒檢測(cè)限的性能評(píng)價(jià),一般是選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽(yáng)性病毒來(lái)作為標(biāo)準(zhǔn)品,用于性能評(píng)價(jià)。但是兩者都具有很明顯的確定,首先體外轉(zhuǎn)錄的RNA,一般是很純,單一,不涉及提取,不符合臨床病毒的微環(huán)境,因此必然造成檢測(cè)靈敏度被高估,這也是存在高概率假陰性的主要原因;再次臨床陽(yáng)性病毒,即使是滅活的病毒,也是存在很大的生物安全隱患,因此要求實(shí)驗(yàn)室級(jí)別為P3-P4,大部分開(kāi)發(fā)診斷試劑盒單位都不滿(mǎn)足改要求,另外臨床陽(yáng)性病毒也是來(lái)源很有限,不能被穩(wěn)定供應(yīng),反復(fù)用于試劑盒的性能評(píng)價(jià)。

 
II.產(chǎn)品描述

有病毒的完整包膜結(jié)構(gòu),有HCoV-HKU1對(duì)應(yīng)的核酸序列,但是生物安全風(fēng)險(xiǎn)較低的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品,完美的克服了選擇體外轉(zhuǎn)錄的RNA、或者臨床陽(yáng)性病毒來(lái)作為標(biāo)準(zhǔn)品的缺點(diǎn),非常適合用于核酸診斷性能評(píng)價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品。

構(gòu)建過(guò)程:HCoV-HKU1基因合成→假病毒包裝→純化→QC檢測(cè)(ddPCR)

 
III. 產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品名稱(chēng): hCov-HKU1-E Pseudovirus Standard Reference
對(duì)應(yīng)序列(詳情見(jiàn)附錄):

Gene E(249bp)

產(chǎn)品規(guī)格: 1ml
拷貝數(shù): >1x10e7copies/ml
生物安全級(jí)別: P2
運(yùn)輸與保存方式: 干冰運(yùn)輸,-80°C保存
有效期:  
 
IV. 產(chǎn)品用途與優(yōu)勢(shì)
產(chǎn)品用途: HCoV-HKU1診斷試劑盒性能評(píng)價(jià)
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì): • HCoV-HKU1的假病毒標(biāo)準(zhǔn)品,區(qū)別于以往體外合成的RNA、臨床陽(yáng)性活病毒,完美克服兩者的缺點(diǎn),真正適合用于試劑盒的性能評(píng)價(jià),包含檢測(cè)限、特異性,重復(fù)性等;

• 根據(jù)HCoV-HKU1冠狀病毒的特點(diǎn),選取了ORF1ab/RdRP(RNA-dependent RNA polymerase)、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合計(jì)3個(gè)區(qū)段的序列,用于假病毒的包裝,3個(gè)區(qū)段很好的表征了HCoV-HKU1的特征序列;

• 科佰生物設(shè)計(jì)了ddPCR體系的引物、探針序列,可不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提下完成對(duì)假病毒的QC拷貝數(shù)檢測(cè),非常準(zhǔn)確表征標(biāo)準(zhǔn)品的拷貝數(shù),而且克服了Q-PCR分析CT值的相對(duì)判斷標(biāo)準(zhǔn)的不準(zhǔn)確性;

• 假病毒標(biāo)準(zhǔn)品,無(wú)致病性,可再生,質(zhì)控方法可靠,批次間穩(wěn)定,可以長(zhǎng)期穩(wěn)定制備和供應(yīng),而且要求實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別為P2,滿(mǎn)足很多單位的安全需求。

 
Ⅴ. 附錄

Gene E:

ATGGTTGATTTATTTTTCAATGATACTGCTTGGTACATAGGACAGATTTTAGTTTTAGTTTTATTTTGTCTTATTTCTTTAATCTTTGTTGTTGCTTTTTTAGCAACTATTAAGCT

TTGTATGCAACTTTGTGGTTTTTGTAATTTCTTTATTATTTCACCTTCGGCTTACGTTTATAAAAGAGGTATGCAGTTGTATAAGTCTTATAGTGAACAAGTTATACCACCCACTT

CAGATTATTTAATCTAA

 

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