三家公司均未檢測(cè)出10%的污染樣本，有兩家檢測(cè)出20%污染樣本和30%污染樣本，但是分析未報(bào)出全部差異位點(diǎn)，一家三個(gè)污染樣本均未檢出。通過分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，除了與CE的靈敏度相關(guān)外，與實(shí)驗(yàn)人員對(duì)結(jié)果的判讀也有很大關(guān)系。

Fig 2. 不同污染占比濃度的STR樣本在三家公司Penta E基因座的STR檢測(cè)結(jié)果圖，其他20個(gè)基因座有類似的情況，文中不一一羅列。

1. 現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)

傳統(tǒng)STR技術(shù)的局限性：STR（短串聯(lián)重復(fù)序列）作為法醫(yī)DNA鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在檢測(cè)混合樣本及微量DNA樣本時(shí)，其靈敏度受到限制。尤其對(duì)于死者樣本中含有少量嫌疑人DNA的情況，毛細(xì)血管電泳技術(shù)可能無法有效檢出。

受到MSI（微衛(wèi)星不穩(wěn)定性）檢測(cè)的啟示：MSI伴隨診斷試劑盒，檢測(cè)限可達(dá)30%。雖然MSI主要針對(duì)單核苷酸和二核苷酸重復(fù)序列，技術(shù)難度較高，但也提示我們，四核苷酸重復(fù)序列的STR可能具備更高的靈敏度開發(fā)潛力。

新興技術(shù)的可能性：NGS（下一代測(cè)序）和dPCR（數(shù)字PCR）技術(shù)作為更為精準(zhǔn)和靈敏的分子檢測(cè)工具，已在臨床、科研等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景。將這些技術(shù)應(yīng)用于STR檢測(cè)中，或許可以突破現(xiàn)有STR檢測(cè)的靈敏度瓶頸。

2. NGS與dPCR在STR檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)

NGS技術(shù)：

• 高靈敏度與多位點(diǎn)檢測(cè)：NGS可實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)STR位點(diǎn)的深度測(cè)序，提高檢測(cè)靈敏度，尤其適用于復(fù)雜混合樣本的分析。

• SNP與STR結(jié)合：已有公司推出基于SNP的NGS方法，這為STR檢測(cè)提供了新的思路。將NGS技術(shù)與STR檢測(cè)相結(jié)合，可提高樣本分辨率與靈敏度。

• 溯源與個(gè)體識(shí)別：NGS可以實(shí)現(xiàn)對(duì)微量DNA樣本的高通量檢測(cè)，區(qū)分相近細(xì)胞系，同時(shí)還可以檢測(cè)細(xì)微的污染，同時(shí)針對(duì)鼠源以及人源，不需要做二次實(shí)驗(yàn)。

DdPCR技術(shù)：

• 超高靈敏度：dPCR通過將DNA樣本進(jìn)行絕對(duì)定量分割，可實(shí)現(xiàn)對(duì)極微量DNA的精準(zhǔn)定量，檢測(cè)靈敏度遠(yuǎn)超傳統(tǒng)PCR技術(shù)。

• 絕對(duì)定量與低豐度檢測(cè)：dPCR在低豐度DNA檢測(cè)方面優(yōu)勢(shì)顯著，特別適用于微量DNA或高混合度樣本的分析。

• STR位點(diǎn)檢測(cè)的潛力：將dPCR技術(shù)應(yīng)用于STR檢測(cè)，可進(jìn)一步提升微量DNA的檢出能力，彌補(bǔ)傳統(tǒng)PCR的不足。

3.倡議與發(fā)展方向：

面對(duì)快速變化的科學(xué)需求和技術(shù)挑戰(zhàn)，STR技術(shù)的進(jìn)一步升級(jí)迫在眉睫。為推動(dòng)STR技術(shù)創(chuàng)新與優(yōu)化，滿足更高精度、更廣泛應(yīng)用的需求，我們特此發(fā)出倡議：

• 研發(fā)更高靈敏度的NGS-STR方法：結(jié)合NGS的高通量與精準(zhǔn)性，開發(fā)針對(duì)STR位點(diǎn)的高靈敏度測(cè)序方法，用于混合樣本鑒定。

• 探索dPCR在STR檢測(cè)中的應(yīng)用：優(yōu)化數(shù)字PCR技術(shù)，使其能夠精準(zhǔn)檢測(cè)微量、低豐度的STR位點(diǎn)，尤其是復(fù)雜背景下的樣本。

• 多技術(shù)融合：整合NGS、dPCR與SNP分析，形成靈敏度更高、分辨率更強(qiáng)的法醫(yī)物證鑒定體系。

•  其他方法學(xué)。