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NFAT-Luc/THP-1

CBPB0003

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I. Background
      細胞內鈣(Ca 2+)通過激活多種下游細胞介質來調節(jié)多種細胞功能。細胞內 Ca 2+水平 升高導致 Ca 2+ 和鈣調蛋白依賴性磷酸酶鈣調磷酸酶的激活。鈣調磷酸酶可去磷酸化并激活 轉錄因子活化 T 細胞核因子 (NFAT) 家族,該家族在免疫功能、炎癥反應、血管生成、 細胞增殖和分化中起關鍵作用。

      NFAT 家族由 NFAT1、NFAT2、NFAT3、NFAT4、NFAT5 五個成員組成,除 NFAT5 外, 該家族的所有其他成員都受細胞內 Ca 2+變化的調節(jié)。NFAT 蛋白具有一個保守的 N 末端結 構域,其中包含多個絲氨酸殘基,這些殘基在靜息條件下被磷酸化。NFAT 蛋白的核轉位 在 N 末端調節(jié)結構域磷酸化后受到抑制。當細胞受到刺激時,絲氨酸殘基的去磷酸化是由 Ca 2+依賴性磷酸酶鈣調磷酸酶介導的。去磷酸化暴露了核定位信號,并促進了核轉位和 NFAT 調節(jié)基因的轉錄誘導。響應鈣調磷酸酶 Ca 2+介導的激活,NFAT 蛋白可以自行誘導基 因表達,也可以與其他轉錄因子協(xié)同誘導基因表達。NFAT 蛋白與其他轉錄因子(如激活 蛋白 1(AP-1)結合并協(xié)同發(fā)揮作用,以誘導基因轉錄。由于與其他轉錄因子相互作用, NFAT 蛋白可以整合來自不同途徑的信號并執(zhí)行多種細胞功能。NFAT 蛋白在免疫細胞中的 重要功能之一是誘導炎性細胞因子表達。
 
II. Description
      NFAT-Luc THP-1 報告基因藥靶模型很好的模擬了體內 NFAT 的信號轉導過程,原理見下圖所示。



Figure 1. 
NFAT Stimulation Assay 驗證結果
 
III. Introduction
Host Cell: THP-1
Expressed gene: NFAT-Luciferase
Stability: 32 passages (in-house test, that not means the cell line will be instable beyond the passages we tested.)
Freeze Medium: 90% FBS+10% DMSO
Culture Medium: RPMI-1640+10%FBS+100 μg/ml hygromycin
Mycoplasma Testing: Negative
Storage: Liquid nitrogen
 
IV. Description of Host Cell Line
Organism: Homo sapiens, human
Tissue: Peripheral blood
Disease: Acute monocytic leukemia
Morphology: Monocyte
Growth Properties: Suspension
 
Ⅴ. Representative Data



Figure 2. Induction of NFAT activity by Cell Stimulation Cocktail  in  NFAT-Luc THP-1(C1).


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