KRAS 基因是 RAS 基因家族成員之一。在 RAS 基因家族中，還有 NRAS 和 HRAS。 KRAS 是一種小鳥苷三磷酸酶，通過將膜生長(zhǎng)因子受體與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子偶聯(lián)， 在細(xì)胞增殖、分化、存活和代謝等生物過程中充當(dāng)開關(guān)。

      KRAS 突變通常發(fā)生在 KRAS 基因的氨基酸殘基 12、13 或 61 處，殘基 12 （G12C、 G12D、G12R、G12A、G12S 和 G12V ） 是最常見的突變位點(diǎn)。KRAS[G12C]是非小細(xì)胞 肺癌（NSCLC）中最常發(fā)生的基因突變之一，它激活了 RAS/MAPK 信號(hào)通路并維持增殖 信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和擴(kuò)散。KRAS 是癌癥中最常見的基因突變之一， 約 90%的胰腺癌腫瘤中都能檢測(cè)到 KRAS 突變，接受化療的胰腺癌患者的診斷后生存期通 常只有 6~12 個(gè)月，且只有不到 40%的胰腺癌患者會(huì)對(duì) KRAS 抑制劑治療產(chǎn)生反應(yīng)。

      免疫治療是 NSCLC 的一種新興療法，可通過激活患者的免疫系統(tǒng)抑制腫瘤生長(zhǎng)。有 研究表明，激活 KRAS 信號(hào)通路可上調(diào) PD-L1 表達(dá)。KRAS 突變的腫瘤往往含有較高的腫 瘤突變負(fù)荷和較多的腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，表明 KRAS 突變通常與炎癥性腫瘤微環(huán)境和腫瘤 免疫原性相關(guān)，為免疫療法提供了理論依據(jù)。

      BaF3（小鼠原 B 細(xì)胞）的生長(zhǎng)和增殖需要 IL-3 的維持。通過引入各種表達(dá)激酶的基因， 能作為 BaF3 的驅(qū)動(dòng)基因，讓 BaF3 不再依賴 IL-3 而增殖，進(jìn)而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴的驅(qū)動(dòng)基因，用于評(píng)估小分子藥物對(duì)激酶的靶向抑制作用，原理及流程見下圖所示。
 

Figure 1. KRAS[G12D&Y64H] BaF3 細(xì)胞的構(gòu)建原理圖

1. WB of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3



Figure 2. WB of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3


2. Sanger of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3

Figure 3.  Sanger of  KRAS[G12D&Y96D] BaF3
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of KRAS[G12D&Y96D] BaF3 (C1).